CHO HCP ELISA 檢測試劑盒說明書

貨號：HG-HCP003

產(chǎn)品簡介：

BlueKit系列系列蛋白A（Protein A）ELISA檢測試劑盒是用于定量檢測生物制品中蛋白A殘留量的專用試劑盒。

本試劑盒采用雙抗夾心法，用捕獲抗體包被96孔酶標(biāo)板，制成固相抗體，隨后加入標(biāo)準(zhǔn)品和檢測樣品，再加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的酶標(biāo)抗體，形成一個固相抗體-蛋白A-酶標(biāo)抗體的三明治結(jié)合物，反應(yīng)結(jié)束后洗滌，然后加入底物進(jìn)行顯色反應(yīng)，底物在HRP的催化下由無色轉(zhuǎn)變成藍(lán)色，并在終止液的作用下轉(zhuǎn)變成最終的黃色。在450nm和630nm波長下測定其吸光度值（OD值），其中630nm為校正波長。OD值與樣品中的蛋白A含量呈正相關(guān)。

檢測范圍：1.56-100 ng/mL

定量限：1.56 ng/mL

規(guī)格：

96T

應(yīng)用：

適用于生物制品純化工藝過程的優(yōu)化、中間工藝過程的雜質(zhì)控制以及終產(chǎn)品的放行檢測。

試劑盒組成：

備 注:所有組分存儲溫度均為 2~8℃，有效期12個月。

需自行準(zhǔn)備的材料

◆酶標(biāo)儀

◆去離子水

◆微孔板恒溫振蕩器

◆全新濾紙

◆微量移液器及吸頭

◆渦旋振蕩器

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1.所有試劑以及待測樣本需要恢復(fù)室溫（18-25℃）。所有試劑現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.1× 洗液配制：濃縮洗液平衡至室溫（18-25℃），不要有結(jié)晶?；靹蚝蟾鶕?jù)用量，取適量用超純水按 1：19 的比例，將20× 洗液稀釋 20 倍，最終得到 1×洗液。

3.1x 檢測抗體配制：50× 檢測抗體充分溶解后，離心，然后用稀釋液 2 以 1：49 的比例進(jìn)行稀釋。備注：若需同時(shí)使用多瓶校準(zhǔn)品，請分別溶解后轉(zhuǎn)移至 1.5 mL 無菌離心管，振蕩混勻后使用；若每瓶校準(zhǔn)品復(fù)溶液涉及多次凍融，建議采用 1.5 mL 無菌離心管酌量分裝后在≤ -18 ℃保存。

4.1× 酶結(jié)合物配制：100× 酶結(jié)合物充分溶解后，離心，然后用然后用稀釋液 2 以 1：99 的比例進(jìn)行稀釋。 

備注：取出濃縮緩沖液（10×）和稀釋液，觀察如有結(jié)晶屬正?，F(xiàn)象，于 37 ℃溫育直至完-全溶解。

5. 標(biāo)準(zhǔn)品的配制：準(zhǔn)備 8 個 1.5mL 離心管，按照標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次標(biāo)記。取 12 微升標(biāo)準(zhǔn)品和 588μL 稀釋液 1 分別加入第 1 個離心管，混勻即為ST1（100ng/mL）,剩下7個離心管分別加入300μL稀釋液1，再按下圖進(jìn)行梯度稀釋。

操作步驟

1.清洗酶標(biāo)板：用 1× 洗液（300μL/ 孔）洗板三次，拍干。
2.孵育樣本：對應(yīng)加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本，100μL/ 孔，37℃孵育 1h。
3.清洗酶標(biāo)板：棄去孔中液體，加入 1× 洗液（300μL/ 孔），洗板五次，拍干。
4.檢測抗體孵育：將配制好的 1×檢測抗體加入到孔中，100μL/ 孔，37℃孵育 1h。
5.清洗酶標(biāo)板：棄去孔中液體，加入 1× 洗液（300μL/ 孔），洗板五次，拍干。
6.酶結(jié)合物孵育：將配制好的 1×酶結(jié)合物加入到孔中，100μL/ 孔，37℃孵育 40min。
7.清洗酶標(biāo)板：棄去孔中液體，加入 1× 洗液（300μL/ 孔），洗板五次，拍干。
8.顯色：使用前的10min 將顯色液恢復(fù)至室溫，每孔加入 100μL，37℃避光孵育 15min。
9.終止：每孔加入 50μL 終止液，輕輕搖動酶標(biāo)板至顯色均勻。
10.上機(jī)：10min 內(nèi)上酶標(biāo)儀，讀取 450nm/630nm 波長處的吸光度值（450nm 為檢測波長，630nm 為參比波長）。

結(jié)果處理

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線OD處理（見下例，僅為示例，具體以實(shí)際測定為準(zhǔn)）

2. 以標(biāo)準(zhǔn)品理論濃度與對應(yīng)OD值進(jìn)行四參數(shù)擬合，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線（如下圖所示）

注意事項(xiàng)

1. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明儲存，使用前室溫（18-25℃）平衡。
2. 預(yù)包被板條使用前，請平衡至室溫（18-25℃）再打開外包裝袋，實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝中密閉封口， 4℃可保存一個月。其余不用試劑應(yīng)包裝好或蓋好。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品、生物-素及酶結(jié)合物體積量很小，使用前請短暫離心，以使管壁或管蓋的液體沉積到管底。
4. 實(shí)驗(yàn)操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
5. 使用前檢查試劑盒內(nèi)各種試劑。試劑稀釋、加樣和終止反應(yīng)應(yīng)充分混勻或搖勻?qū)?shí)驗(yàn)結(jié)果尤為重要。
6. 洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗液應(yīng)在潔凈的紙巾上充分拍干，直至看不到水印。勿將紙巾直接放入反應(yīng)孔中吸水。
7. 底物顯色液對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下，避免與金屬接觸影響結(jié)果。
8. 本產(chǎn)品為一次性使用的試劑盒，請?jiān)谛趦?nèi)使用。

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