貨號： HG-TR001

產(chǎn)品簡介：

本試劑盒采用雙抗體夾心法原理，并偶聯(lián)生物i素 - 鏈霉親和素系統(tǒng)。酶標板微孔中包被抗胰yi蛋白酶抗體，加入樣本后孵育洗滌，再加入生物i素化檢測抗體孵育，形成抗體- 抗原 -抗體復(fù)合物，再次洗滌后加入辣根過氧化物酶（HRP）標記鏈霉親和素（streptavidin， SA）。經(jīng)過徹i底洗滌后加底物 TMB 顯色，TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，經(jīng)酸的終止作用轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中胰yi蛋白酶含量呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），根據(jù)標準曲線計算樣品中胰yi蛋白酶濃度。

檢測范圍：0.039~2.5 ng/mL
檢  測  限：0.003ng/mL
定  量  限：0.039ng/mL
精  密  度：CV% ≤ 10%
回  收  率：80%~120%

規(guī)格：

96 T

應(yīng)用：

適用于定量檢測樣本中胰yi蛋白酶的含量。

產(chǎn)品組成：

備注：試劑盒保存溫度為2~8℃ 。

產(chǎn)品儲存條件與有限期：

未開封的試劑盒， 2-8℃條件下有效期為12個月。

材料準備：

（1）酶標儀
（2）酶標板恒溫振蕩器
（3）移液器及一次性吸頭（0.5-10µL,10 -100µL,30-300µL,100-1000µL）

（4）去離子水 

（5）吸水紙 

（6）EP 管

實驗前準備準備：

（1）將試劑盒平衡至室溫（18~25°C）。
（2）20×濃縮洗滌液用純化水按1：19 體積比稀釋成洗滌工作液。
（3）100×生物i素化檢測抗體和100×HRP-鏈霉親和素在使用前i10-15min 用稀釋液作100倍稀釋并平衡至室溫后使用。
（4）標準品用稀釋液稀釋至2.5ng/mL、1.25ng/mL、0.625ng/mL、0.3125ng/mL、0.156ng/mL、0.078ng/mL、0.039ng/ mL、0ng/mL。

操作步驟：

（1）從室溫平衡后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條加蓋封板膜后用自封袋密封放回2~8℃。 

（2）設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加入不同濃度的標準品100μL，樣本孔中加入待測樣本100μL。500μL稀釋液0（ng/mL）    

 * 當不能夠確定待測樣品中的胰yi蛋白酶含量時，應(yīng)當用稀釋液做多個稀釋倍數(shù)做檢測，以免含量過高不能夠讀取有效數(shù)值。 

（3）用封板膜封住反應(yīng)孔， 室溫（18~25℃）下振板(500rpm)反應(yīng)60min。 

（4）棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(300μL)，靜置30s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5 次。 

（5）標準品孔和樣本孔中每孔加入工作濃度的生物i素化檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，室溫（18~25℃）下振板(500rpm) 反應(yīng)60min。

（6）棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(300μL)，靜置30s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5 次。 

（7）標準品孔和樣本孔中每孔加入工作濃度的HRP-鏈霉親和素100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，室溫（18~25℃）下振板(500rpm）反應(yīng)30min。 

（8）棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(300μL)，靜置30s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5 次。 

（9）每孔加入單組分底物顯色液100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃靜置避光反應(yīng)10min。 

（10）每孔加入終止液50μL，立即進行檢測，設(shè)定酶標儀波長于450nm 處(建議用雙波長450nm/650nm）。

標準曲線：

實驗檢測結(jié)果：

注意事項：

（1）顯色溫度和時間對實驗結(jié)果至關(guān)重要，應(yīng)準確把握。 

（2）洗滌過程中應(yīng)使洗滌液浸泡反應(yīng)板30s 后再甩干，以充分洗滌非特異性吸附的成分。 

（3）所有試劑使用前應(yīng)充分搖勻，加樣時應(yīng)將所加樣物加入酶標板孔中底部，避免加在孔壁上部，加樣時注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。 

（4）若發(fā)現(xiàn)濃縮洗滌液中有結(jié)晶，可在37℃水浴鍋中孵育，待結(jié)晶完i全溶解后再混勻稀釋至工作濃度。 

（5）樣本中應(yīng)避免引入疊氮i化鈉(NaN3），疊氮i化鈉會破壞辣根過氧化酶活性，使檢測值偏低。 

（6）實驗前請先將抗體管和HRP-鏈霉親和素管1000 rpm離心30s，以避免管壁及管蓋上殘留試劑。

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