美國AAT Bioquest公司

前身是ABD Bioquest，Inc. 簡稱AATbio，是一家為從事生命科學研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學家提供研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學檢測領域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術。

AAT Bioquest產(chǎn)品系列

1、用于標記小藥物分子和生物聚合物（如蛋白質(zhì)，核酸和碳水化合物）的反應熒光和發(fā)光探針，生物素和標簽酶

2、用于檢測蛋白質(zhì)，核酸和活細胞的熒光和發(fā)光探針

3、用于檢測多種酶的熒光和發(fā)光探針，特別是水解和氧化還原酶

4、開發(fā)用于信號轉導研究的試劑

5、生理和神經(jīng)學探針，如鈣指示劑和膜電位探針

AAT Bioquest產(chǎn)品列表

關于熒光染料：   

染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一類親脂性熒光染料家族，用于標記細胞膜和疏水性組織。這是一類環(huán)境敏感型熒光染料，當它們與膜結合或者與親脂性生物分子結合時，其熒光強度顯著增強。它們具有很高的淬滅系數(shù)，偏光依賴性和很短的激發(fā)壽命。一旦應用于細胞中，這種染料會在細胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴散，導致在其最佳濃度條件下，將整個細胞染色。

熒光顏色

DiI（橙色 ）   DiO（綠色）

DiD（紅色 ）  DiR（深紅）

這些顏色為活細胞多色彩熒光成像分析和流式細胞術提供了一種便捷的工具。DiO和DiI可以分別與標準的FITC和TRITC濾光器一同使用，其中，DiO可以被633 nm He-Ne激光激發(fā)，并且具有比DiI更長的激發(fā)和發(fā)射光波長，為標記細胞和組織的那些本身就具有本底熒光的染料提供了非常優(yōu)質(zhì)的替代品。

使用方法：

1. DiD，DiO，DiI，DiR和DiS細胞膜染色液制備

  (1) 配置DMSO或EtOH 儲存液：

      儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。

      注意：未使用的儲存液保存在-20℃，避免反復凍融

  (2) 工作液制備：

      用合適的緩沖液(如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS)

      稀釋儲存液，配制濃度為1～5 µM的工作液。

     注意：工作液的最終濃度是根據(jù)不同細胞和實驗的經(jīng)驗來配制。可以從推薦濃度的十倍以上尋找最佳條件。

2. 懸浮細胞染色

  (1) 懸浮細胞密度為 1 × 106/mL加入到工作液中。

  (2) 37℃培養(yǎng)細胞 2～20分鐘，

       不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同。

  (3) 1000～1500轉離心5分鐘。

  (4) 傾倒上清液，再次緩慢加入預溫37的培養(yǎng)液。

  (5) 重復(3)，(4)步驟兩次以上。

3. 粘壁細胞的染色

  (1)使粘壁的細胞在無菌實驗室培養(yǎng)。

  (2)從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。

  (3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。

  (4)在37 培養(yǎng)細胞 2～20分鐘，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同。

  (5)吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。

4. 流式細胞儀的檢測

  DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的細胞可以分別用經(jīng)典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細胞儀檢測。

柏萊源（天津）科技有限公司為廣大科研用戶提供AAT Bioquest品牌的全線產(chǎn)品